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LR 白色樹(shù)脂

使用 lr white 作為電子顯微鏡時(shí)，使用 lr white 作為專用電子顯微鏡的包埋樹(shù)脂，對(duì)環(huán)氧樹(shù)脂包埋體系只需做很少的改動(dòng)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有自己的嵌入時(shí)間表，但是我們?cè)谶@里列出了一個(gè) lr white 的典型時(shí)間表作為其使用的指南。固定: 如果只需要對(duì)最后的積木進(jìn)行電鏡分析，則不應(yīng)改變正常的固定。然而，如果需要良好的超微結(jié)構(gòu)和廣泛的 lm 染色，那么我們發(fā)現(xiàn)在磷酸鹽緩沖液 ph 7.2中加入2.5% w/v 蔗糖是折衷多聚甲醛。單獨(dú)使用戊二醛和 karnovsky 的戊二醛-甲醛混合物可能會(huì)導(dǎo)致 lm 染色不均勻，有些染色不起作用或產(chǎn)生"假陽(yáng)性"(如 pas) ，而正常的福爾馬林固定會(huì)產(chǎn)生不可接受的 em 超微結(jié)構(gòu)。對(duì)于雙重 lm/em 應(yīng)用，應(yīng)該避免使用，因?yàn)樗鼤?huì)對(duì)很多 lm 著色產(chǎn)生影響，但是在脫水的第一乙醇，1% 的磷鎢酸可以提高電子對(duì)比度，而不會(huì)對(duì)大多數(shù) lm 著色產(chǎn)生不利影響。如果塊僅用于專用電子顯微鏡，則可以使用。脫水: 分級(jí)乙醇系列是方法的選擇時(shí)，包埋’紅色白’。丙酮在樹(shù)脂體系中起著清除自由基的作用，因此固化時(shí)組織中留下的丙酮痕跡可以干擾這種聚合。因此，最好避免使用梯度丙酮系列和2,2- 二甲氧基丙烷(產(chǎn)生丙酮)。如果2,2- 二甲氧基丙烷的使用被認(rèn)為是至關(guān)重要的，我們建議在滲透之前用持久的樹(shù)脂滲透或用干乙醇清洗組織，以盡量減少丙酮污染最終樹(shù)脂的機(jī)會(huì)。滲透: 極低的粘度的’lr 白’可以利用允許使用短的滲透時(shí)間或大的標(biāo)本，但不是兩者！如果在此期間在60攝氏度進(jìn)行4-6次“ lr 白"變化，1毫米立方體的動(dòng)物組織將在大約3小時(shí)內(nèi)被充分浸潤(rùn)。然而，在室溫下徹夜浸潤(rùn)，然后兩次短暫的樹(shù)脂變化通常會(huì)更方便。由于「 lr white 」的保質(zhì)期長(zhǎng)及提取率低，因此如有需要，樣本(例如儲(chǔ)存組織)可在4 °c 的樹(shù)脂中安全存放數(shù)星期。大塊的確比小塊的滲透時(shí)間長(zhǎng)得多。

聚合: 帶有的樣品不應(yīng)用促進(jìn)劑“冷固化"。這個(gè)過(guò)程是強(qiáng)烈的放熱過(guò)程，組織的深色會(huì)導(dǎo)致局部熱量積聚，從而消除組織內(nèi)部和周圍的局部問(wèn)題。如果組織沒(méi)有固定，那么可以使用“ lr white"加速器進(jìn)行治療。與光學(xué)顯微鏡的固化塊一樣，我們建議在聚合過(guò)程中冷卻模具，但無(wú)需將氧氣排除在固化塊表面之外。在聚合反應(yīng)發(fā)生時(shí)，限制氧氣與樹(shù)脂的接觸是很重要的。實(shí)現(xiàn)膠囊型包埋方便的方法是使用明膠膠囊(可從瓊脂科學(xué)中獲得) ，填充到邊緣，然后將膠囊的另一半放在上面。

如果切割方向需要平面包埋，則樹(shù)脂表面必須用氧氣覆蓋，一個(gè)方便的方法是使用 jb-4型模具和卡盤(pán)，用于光學(xué)顯微鏡觀察，聚合后卡塊可能被鋸斷并重復(fù)使用。聚合時(shí)間和溫度是最終塊體物理特性的基礎(chǔ)，比未固化的環(huán)氧體系要高得多，我們強(qiáng)烈建議溫度為60 °c ± 2，持續(xù)20-24小時(shí)。有些烘箱不能如此嚴(yán)格地控制聚合溫度，如果面對(duì)過(guò)于脆弱的塊，這是第一個(gè)參數(shù)檢查。 lr 白色具有好的滲透力，可以穿透和軟化一些低密度聚乙烯膠囊。這會(huì)導(dǎo)致它們扭曲和崩潰。這兩個(gè)問(wèn)題都可以通過(guò)使用明膠膠囊(00號(hào)膠囊的尺寸與普通聚乙烯膠囊的尺寸相似)來(lái)解決，而且這些膠囊更便宜，在聚合過(guò)程中也更容易密封。樹(shù)脂可以直接從冰箱中取出，與環(huán)氧樹(shù)脂不同，它在單體和聚合狀態(tài)下的毒性都很低。冷固化促進(jìn)劑確實(shí)有一定的毒性風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)避免與皮膚和眼睛接觸。冷固化促進(jìn)劑應(yīng)以每10毫升樹(shù)脂中一滴的速度使用，這會(huì)在10至20分鐘內(nèi)引起聚合。如果聚合速度超過(guò)這一點(diǎn)，我們建議更仔細(xì)地測(cè)量一滴加速劑或更高容量的樹(shù)脂每滴制造商。修邊和切割: 修邊可以使用珠寶商、剃須刀或環(huán)氧樹(shù)脂塊在超微切割機(jī)上使用玻璃刀。切割的方式可以與使用玻璃刀或鉆石刀的環(huán)氧樹(shù)脂相同。切片染色: 所有常見(jiàn)的切片染色劑都能在“ lr 白色"樹(shù)脂包埋的組織上取得良好的效果。在乙醇或甲醇中形成的污漬應(yīng)該避免，因?yàn)檫@些溶劑會(huì)使樹(shù)脂軟化，并且可以去除網(wǎng)格狀污漬。作為醋酸鈾酰的替代品，1% 的磷鎢酸已被證明是一種很好的通用染色劑，無(wú)論是作為塊狀染色劑(如前所述) ，還是作為切片染色劑。在電子顯微鏡中，初次接觸樹(shù)脂時(shí)，電子密度可能會(huì)減少，這被認(rèn)為是因?yàn)閺牡洞蛉旧褐形樟怂?。這樣的稀釋沒(méi)有發(fā)生，標(biāo)本在120kv 電子束下放置了3個(gè)小時(shí)，沒(méi)有明顯的損壞跡象。

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