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HCP免疫測(cè)定

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）構(gòu)成了使用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的生物藥物中與過(guò)程相關(guān)的主要雜質(zhì)。HCPs是在重組生物藥物表達(dá)過(guò)程中無(wú)意中產(chǎn)生的，如從宿主細(xì)胞中分泌，由于細(xì)胞應(yīng)激以及在生物過(guò)程制造過(guò)程中細(xì)胞裂解引起的異常細(xì)胞運(yùn)輸所致。CHO細(xì)胞可產(chǎn)生70％以上的生物原料藥，但 大腸桿菌， 巴斯德畢赤酵母， HEK 293細(xì)胞和HEK 293細(xì)胞也是常見(jiàn)的表達(dá)平臺(tái)。無(wú)論使用哪種電池類型，HCP都是與工藝相關(guān)的主要雜質(zhì)。由于宿主細(xì)胞蛋白（HCP）可能給患者帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)并影響藥物的功效和穩(wěn)定性，因此必須設(shè)計(jì)生物制藥純化工藝以去除盡可能多的HCP。申請(qǐng)IND（研究用新藥）時(shí)需要HCP清除，以降低臨床試驗(yàn)的風(fēng)險(xiǎn)。

健壯且具有廣泛反應(yīng)性的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是監(jiān)測(cè)純化過(guò)程一致性以及最終原料藥純度的關(guān)鍵工具，是HCP產(chǎn)品監(jiān)測(cè)和釋放測(cè)試的金標(biāo)準(zhǔn)方法。HCP ELISA可以在mg / ml水平的產(chǎn)品蛋白質(zhì)存在的情況下測(cè)量ng / ml水平的HCP，不需要專門的技術(shù)來(lái)運(yùn)行，并且很容易在整個(gè)組織中從過(guò)程開(kāi)發(fā)到制造質(zhì)量控制組轉(zhuǎn)移。

“免疫測(cè)定方法依賴于能夠盡可能廣泛地識(shí)別進(jìn)入下游純化過(guò)程的HCP群體的抗體；因此，用多克隆抗體設(shè)計(jì)的夾心免疫測(cè)定是HCP監(jiān)測(cè)和定量的主要手段。這種測(cè)定形式提供了高靈敏度，特異性，通量，自動(dòng)化潛力，快速周轉(zhuǎn)，定量結(jié)果和每次測(cè)定的低成本的組合，這是任何其他當(dāng)前可用的測(cè)定技術(shù)所。” –  USP第1132章，3。HCP免疫測(cè)定方法

同時(shí)，HCP ELISA需要高水平的專業(yè)知識(shí)才能開(kāi)發(fā)出具有廣泛反應(yīng)性的HCP抗體，然后將其轉(zhuǎn)變?yōu)闇?zhǔn)確，靈敏，特異且穩(wěn)定的分析方法。此外，ELISA無(wú)法提供有關(guān)最終藥物中存在的單個(gè)HCP的信息，正在識(shí)別哪些HCP或測(cè)定是否具有廣泛的反應(yīng)性。

世界各地的監(jiān)管機(jī)構(gòu)已采取措施，確保發(fā)起人使用的HCP ELISA適合監(jiān)測(cè)純化過(guò)程的一致性和產(chǎn)品批次的釋放。建議采用 正交方法， 例如抗體親和提?。?/span>AAE™）免疫親和色譜結(jié)合2D-PAGE和/或 質(zhì)譜（MS） 方法來(lái)證明抗體對(duì)單個(gè)HCP的覆蓋率，以支持HCP ELISA適用于目的。同樣重要的是使分析的稀釋度線性，準(zhǔn)確性和精密度合格。

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[1] Durocher，V.等。生物技術(shù)雜志。2017年

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