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    anatrace技術(shù)公告100如何純化膜蛋白膜

    發(fā)布時間: 2020-03-12  點擊次數(shù): 1442次

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    產(chǎn)品列表如下:

    產(chǎn)品貨號       產(chǎn)品名稱       品牌

    F310 1 GM     Fos-Choline-13, Anagrade  anatrace

    NG310    Lauryl Maltose Neopentyl Glycol anatrace

    D310      n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside, Anagrade   anatrace

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    試劑盒包含以下每種物質(zhì)1克:CHAPS,CYMAL-5,F(xiàn)os-Choline-12,n-Decyl-b-D-美洛吡喃糖苷,

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    技術(shù)公告100如何純化膜蛋白膜

    蛋白的研究在過去幾年中取得了顯著的進展。 這在一定程度上要歸功于用于操縱這類蛋白質(zhì)的工具和試劑的進步。 洗滌劑在膜蛋白的提取、純化和操作中起著重要作用,它們的兩親性使它們能夠與疏水性膜蛋白相互作用,使它們在自然的雙分子層環(huán)境之外保持水溶性。 不幸的是,溶解性并不總是轉(zhuǎn)化為天然結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性; 用于萃取的洗滌劑可能與凈化和 / 或生化研究不兼容。 此外,適用于一種膜蛋白的洗滌劑可能不適用于另一種膜蛋白。 雖然沒有一套關(guān)于清潔劑用于膜蛋白的“ 法則” ,但是了解如何凈化膜蛋白在開始你的研究工作時是很有用的。 1. 從類似的來源和類似的薄膜中尋找其他的凈化物。 不同的組織、生物和膜類型有時需要不同的清潔劑和條件; 例如,細菌來源可能需要哺乳動物來源的不同溶解程序。

    *分散和脂質(zhì)過濾是色譜分離成功的關(guān)鍵。 如果蛋白質(zhì)不能從其他蛋白質(zhì)中分離出來,并且大量附著的磷脂被去除,那么蛋白質(zhì)就不能根據(jù)自身的特性進行結(jié)合和色譜分析。 相反,它會在附著的其他蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的基礎上表現(xiàn)異質(zhì)性。3。 一種有利于增溶完整膜和去除多余脂質(zhì)的清潔劑可能不是繼續(xù)純化“裸蛋白”的佳選擇(可能太粗糙)。 因此,在初的步驟中,你可能想要選擇一種相對便宜、相對純凈的洗滌劑,這種洗滌劑可以很容易地換成另一種。 例如,膽酸鹽和類固醇清潔劑都是強烈的,帶電的或兩性離子的,類固醇清潔劑可以很好地破壞薄膜,有助于去除色譜步驟中多余的脂質(zhì),例如羥基磷灰石。 他們也有一個高臨界膠束,這意味著他們可以很容易地通過透析或交換另一個柱。

    色譜純化需要一種良好的分散清潔劑,既能穩(wěn)定蛋白質(zhì),又不會使酶失活。 對許多人來說,triton x-100是非常適合的,但是污染物和280納米吸光度的問題。 十二個碳鏈長度的碳氫化合物尾巴通常是必要的良好的穩(wěn)定和分散,特別是較大的多亞基酶。 十二烷基麥芽糖苷的效果通常和海衛(wèi)一一樣好,甚更好,沒有任何缺點。 短鏈洗滌劑和一些帶電洗滌劑會分離多亞基蛋白質(zhì)。 在這個階段,反復試驗是非常重要的,要注意保持足夠高的洗滌劑與蛋白質(zhì)的比例,以確保蛋白質(zhì)能夠很好地分散(洗滌劑的濃度將遠遠高于 cmc)。 即使一種蛋白質(zhì)在某種特定的洗滌劑中不活躍,如果你能證明這種活躍是可逆的,通過添加脂質(zhì)或其他洗滌劑,你仍然可以使用它。

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