Biolegend流式細胞分選的原理:
當經(jīng)熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中,被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動下,細胞被排成單列,以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體,充電后振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷,當液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,沒有充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實現(xiàn)細胞的分離。
Biolegend流式細胞分選,它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選,能復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等,可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%,保證樣本中目標細胞的高回收率。
1、少量細胞分選時,流式細胞分選度高(99%以上),速度快。的流式細胞儀的分選速度可達25000個細胞/秒以上,比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍,需要的工作只需要幾小時就能完成。不過流式細胞儀分離細胞的量還是有一定的限制,一次分離的大合理量約為108個細胞。如果細胞量超過109個,則需要耗費10小時以上,分選后細胞的活力會受到很大的影響。
2、可以同時進行多個Marker分選,正選負選同時進行。以前的流式細胞儀只能給液滴充上正電荷或負電荷,因此在電場中只能向左或向右偏轉,即兩路分選。儀器可以給液滴充以不同的電量,從而調(diào)整液滴的偏轉角度,實現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細胞儀就可以進行四路分選。
3、不僅于表面抗原,流式細胞儀可以根據(jù)任何能檢測到的發(fā)光度或熒光散射度差異來分離細胞。如果能保證流式細胞儀的無菌狀態(tài),那么分選后的細胞還可以進行培養(yǎng)或其他分析。
4、如果只是偶爾做幾次細胞分選的話,用流式分選還是比較劃算的,只需要準備樣品和抗體,交納一定的儀器使用費即可,不需要購買配套的設備。